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液相分析常見(jiàn)問(wèn)題⑥ 峰面積變來(lái)變去無(wú)法定量
更新時(shí)間:2019-07-22   點(diǎn)擊次數:5847次


峰面積是定量分析的基礎,峰面積的變化會(huì )導致精密度、標曲、定量分析等一系列問(wèn)題。

 

那么,如果遇到峰面積不穩定的情況,我們要怎么辦?讓我們分三種情況分別來(lái)看一看:

 

一、峰面積變小

 

1. 儀器漏液

儀器漏液會(huì )導致樣品損失,與正常測定結果相比,會(huì )出現色譜峰減小的情況。

→這種時(shí)候,需要檢查系統壓力,確保所有螺絲或連接處無(wú)漏液情況,排查儀器方面的原因。

 

2. 樣品穩定性不好

有些樣品自身穩定性不好,配置后,隨著(zhù)進(jìn)樣時(shí)間的推移會(huì )出現降解現象。

→如果連續進(jìn)樣過(guò)程中,主峰的峰面積減小,同時(shí)伴隨雜質(zhì)峰面積增加的情況,建議確認樣品在溶劑或流動(dòng)相中的穩定性情況。

 

3. 進(jìn)樣瓶中樣品量過(guò)少

當樣品瓶中樣品過(guò)少可能導致進(jìn)樣針未吸取到足夠樣品進(jìn)樣。

添加樣品或使用內襯管即可解決。

 

4. 針?lè )迕娣e減小

進(jìn)樣瓶的瓶蓋擰緊后,瓶?jì)葧?huì )出現負壓,可能導致進(jìn)樣器取樣不準確。

→第二次進(jìn)樣時(shí),由于瓶蓋已經(jīng)有孔,負壓消除后進(jìn)樣峰面積會(huì )恢復正常;也可通過(guò)使用預開(kāi)口進(jìn)樣小瓶來(lái)解決該類(lèi)問(wèn)題。

 

二、峰面積變大

 

可能是由于色譜柱或流動(dòng)相條件導致樣品吸附,特別是一些帶電荷情況較為復雜的蛋白或多肽類(lèi)樣品。

→大濃度進(jìn)樣、平衡可能的吸附位點(diǎn)

更換色譜柱優(yōu)化方法

(推薦更換MG、MGII、或Proteonavi進(jìn)行嘗試)

 

▲CAPCELL PAK 聚合物包被結構示意圖

 

Proteonavi

 

Proteonavi是采用在多孔球形硅膠填料表面鍵合丁基(C4的高性能蛋白質(zhì)•多肽分析色譜柱。該填料既具有硅膠類(lèi)填料的高分離能力耐壓性,又具有耐酸性、抑制蛋白質(zhì)吸附等特長(cháng)。

 

★ 具備*的耐酸性

★ 填料表面的蛋白吸附,即使樣品量少也能被檢出

★ 可對應從分析到制備的規模擴大化

 

三、峰面積忽大忽小,變化無(wú)規律

 

1. 自動(dòng)進(jìn)樣器故障或混入氣泡

→進(jìn)樣過(guò)程中,觀(guān)察進(jìn)樣針中無(wú)氣泡混入,如果自動(dòng)進(jìn)樣器出現故障,需要咨詢(xún)相應品牌儀器工程師。

 

2. 樣品過(guò)于黏稠會(huì )導致進(jìn)樣不準確

稀釋樣品通??梢越鉀Q

 

3. 進(jìn)樣瓶中混入氣泡

→部分樣品容易混入氣泡,比如一些表面活性劑類(lèi)樣品,觀(guān)察進(jìn)樣瓶中是否有小氣泡,或者對進(jìn)樣瓶進(jìn)行超聲脫氣。

 

PS: 以上對策主要針對液相分析檢測中出現峰面積不穩的情況,如果在質(zhì)譜分析中出現峰面積不穩,則可能會(huì )有離子化、基質(zhì)效應等其他原因。

 

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